文献类型：期刊文章

作　　者：魏蔷[1] 刘运超[1] 白怡霖[1,2] 冯华[1] 宋亚鹏[1,3] 张改平[1,3,4]

WEI Qiang;LIU Yunchao;BAI Yilin;FENG Hua;SONG Yapeng;ZHANG Gaiping(Key Laboratory of Animal Immunology/Henan Key Laboratory of Animal Immunology/Key Laboratory of Animal Immunology of the Ministry of Agriculture and Rural Affairs(MARA)of China,Henan Academy of Agricultural Sciences,Zhengzhou 450002,China;College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling 712100,China;College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,China;Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses,Yangzhou 225009,China)

机构地区：[1]河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,郑州450002 [2]西北农林科技大学动物医学院,杨凌712100 [3]河南农业大学牧医工程学院,郑州450002 [4]江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州225009

出　　处：《畜牧兽医学报》

年　　份：2020

卷　　号：51

期　　号：1

起止页码：120-127

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2019_2020、EMBASE、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：旨在通过引入信号肽序列实现猪瘟病毒E2蛋白在杆状病毒表达系统中的高效表达。首先将内源信号肽(简称endo)、蜂素信号肽(简称mel)及gp67信号肽(简称gp67)分别引入pFastBac1载体,随后插入E2基因,构建重组质粒。随后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选得到重组黏粒,将重组黏粒转染sf21细胞以得到杆状病毒。经扩增后大量感染细胞,检测E2蛋白表达情况,利用镍填料纯化得到E2蛋白,并进行蛋白糖基化水平鉴定及蛋白免疫原性分析。PCR鉴定结果显示成功构建了重组质粒。挑选白斑进行PCR鉴定,证实得到重组黏粒。Western blot检测结果表明,E2蛋白实现了分泌表达,进一步比较细胞培养上清中E2蛋白的表达水平,确定gp67信号肽介导的E2蛋白分泌表达量最高。经镍填料纯化得到E2蛋白,SDS-PAGE结果显示其纯度较高,产率为25 mg·L^-1。通过ELISA分析其抗原性,结果表明纯化所得E2蛋白能特异性识别猪瘟阳性血清中的抗体,其抗原性良好。将纯化后的E2蛋白添加ISA201佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠,阻断ELISA结果显示,免疫后14 d即产生较高水平的猪瘟特异性抗体,表明E2蛋白免疫原性良好。本研究为E2亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关 键 词：信号肽 E2蛋白 猪瘟病毒(CSFV)  分泌表达

分 类 号：S852.651]