文献类型：期刊文章

作　　者：邓木兰[1] 梁志成[1] 梁秀怡[2] 张智[3] 李芳红[1] 赵子建[1]

DENG Mu-Lan;LIANG Zhi-Cheng;LIANG Xiu-Yi;ZHANG Zhi;LI Fang-Hong;Allan Zijian ZHAO(School of Biomedical and Pharmaceutical Sciences,Guangdong University of Technology,Guangzhou,Guangdong 510006,China;College of Pharmacy and Health Sciences,Saint John’s University,New York 11439,USA;College of Life Science and Oceanography,Shenzhen University,Shenzhen,Guangdong 518060,China)

机构地区：[1]广东工业大学生物医药研究院,广东广州510006 [2]College of Pharmacy and Health Sciences,Saint John’s University,New York 11439,USA [3]深圳大学生命科学与海洋学院,广东深圳518060

出　　处：《微生物学通报》

基　　金：国家自然科学基金(81630021);广东省创新研究团队项目(2016ZT06Y432).

年　　份：2020

卷　　号：47

期　　号：2

起止页码：649-658

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【背景】表达载体是基因工程必不可少的工具,对于真菌如里氏木霉(Trichoderma reesei)等,由于缺乏商品化的表达载体,使其基因工程蛋白表达既复杂又费时而难以开展。【目的】建立一种利用URA3序列快速构建表达载体的方法,解决真菌研究中难以简单、高效和快速构建表达载体的难题。【方法】基于URA3基因的序列,利用其启动子上游5′端序列和终止子下游3′端序列构建同源重组臂,通过同源重组臂定向同源重组到宿主基因组上,利用强启动子和终止子替换URA3基因,从而实现外源基因的表达。根据此方法构建pTRUC表达载体,将红色荧光蛋白基因mCherry克隆到该表达载体上,转化里氏木霉中并验证m Cherry的表达。【结果】阳性转化子在荧光显微镜下观察到强的红色荧光信号,在基因组PCR中检测到mCherry,Westernblotting结果表明红色荧光蛋白m Cherry能在里氏木霉中表达,以上结果说明该载体构建成功,使外源基因mCherry在里氏木霉中正确表达。【结论】基于URA3基因的快速构建表达载体及其构建方法切实可行,将成为推动真核表达系统表达异源蛋白的有力工具。

关 键 词：里氏木霉 红色荧光蛋白 真核表达载体 同源重组 URA3基因  

分 类 号：Q78]