文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201910194703.5

申 请 日：20190314

发 明 人：秦天达 李广善 黄银君 牟克斌 温建波 武志宇 陈亮 刘斌 李金杰 陈晓宇 邢向茹 宫士越 黄娜娜 张媛 魏庭万

申 请 人：天津威特生物医药有限责任公司 天津迦美惠众科技有限公司

申请人地址：300000 天津市滨海新区滨海高新区滨海科技园高新二路39号

公 开 日：20190614

公 开 号：CN109879939A

代 理 人：郭峰

代理机构：11684 北京沁优知识产权代理事务所(普通合伙)

语　　种：中文

摘　　要：本发明提供一种抗体纳米磁珠纯化口蹄疫表位蛋白抗原的方法，包括如下步骤：步骤一：优化抗体磁珠的结合环境；步骤二：加入结合促进剂能够更好地促进口蹄疫表位蛋白抗原和抗体的结合，通过上述抗体磁珠充分捕获抗原；步骤三：加入WB洗涤液能够充分地去掉抗原‑抗体磁珠结合物A表面的非特异性结合的杂质；步骤四：加入EB2洗脱液目的是解离抗体磁珠捕获的抗原；步骤五：加入NB中和液，使得抗原溶液达到中性，避免较低的pH会对抗原造成破坏，影响抗原特性。本发明的纳米磁珠表面添加的功能团能够一步完成与抗体的共价连接，使得抗体牢固地结合在磁珠表面，保证了抗体磁珠捕获抗原的能力，充分提高了效率及减少成本。

主 权 项：1.一种抗体纳米磁珠纯化口蹄疫表位蛋白抗原的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：将10μL混匀后的抗体纳米磁珠放入1.5mL离心管中，再加入200μL BB结合液(Binding Buffer结合液)混合均匀，将上述离心管放到磁力架上进行吸附抗体磁珠，反应1min，移出并弃掉上清液，保留底部抗体磁珠；步骤二：将200μL BB结合液、100μL结合促进剂和20μL口蹄疫表位蛋白抗原加入到步骤一中得到抗体磁珠的离心管中，室温结合30-60min，把离心管放到磁力架上反应1min，移出并弃掉上清，得到离心管底部的抗原-抗体磁珠结合物A；步骤三：加入200μL WB洗涤液(Washing Buffer洗涤液)洗涤步骤二中得到的抗原-抗体磁珠结合物A，充分混合5min，将离心管放到磁力架上反应1min，移出并弃掉上清，保留离心管底部物质；再向上述离心管中加入200μL WB洗涤液进行洗涤，充分混合5min，将离心管放到磁力架上反应1min，移出并弃掉上清，得到离心管底部的抗原-抗体磁珠结合物B；步骤四：将40μL EB2洗脱液(Elution Buffer洗脱液)加入到步骤三中获得抗原-抗体磁珠结合物B的离心管中，室温条件下混合10min，将离心管放到磁力架上反应2min，得到纯化富集后的口蹄疫表位蛋白抗原上清液；步骤五：将步骤四得到的纯化富集后的口蹄疫表位蛋白抗原上清液转移至新的离心管中，加入10μL NB中和液(Neutral Buffer中和液)，混合并低温保存，得到纯化富集后的口蹄疫表位蛋白抗原溶液。

关 键 词：抗体 磁珠  抗原 表位蛋白  捕获抗原  口蹄疫 非特异性结合  纳米磁珠表面  磁珠表面  共价连接  抗原溶液  纳米磁珠  一步完成  影响抗原  促进剂  结合物 洗涤液  洗脱液  中和液 解离  捕获  对抗  优化  保证  

IPC专利分类号：C07K14/09(20060101);C07K1/14(20060101)