文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201610110898.7

申 请 日：20160229

发 明 人：付淑军 王鹏 戴玮 肖苏萍 常新全 左臣强 张守庆 赖东海

申 请 人：瀚盟测试科技(天津)有限公司 中国中药公司

申请人地址：300457 天津市滨海新区经济技术开发洞庭路220号

公 开 日：20180424

公 开 号：CN105738523B

代 理 人：陆艺

代理机构：12201 天津市北洋有限责任专利代理事务所

语　　种：中文

摘　　要：本发明公开了一种液质联用法检测血浆中表儿茶素及表儿茶巯代物含量的方法，包括如下步骤：(1)含药血浆样品制备；(2)工作曲线样品的制备；(3)LC测定条件；(4)MS/MS条件：(5)采用内标法定量，以系列表儿茶素及表儿茶素巯代物在空白血浆的药物浓度为横坐标，表儿茶素及表儿茶素巯代物与内标物普萘洛尔的峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，权重系数为1/x<Sup>2</Sup>，求得的直线回归方程，即为工作曲线，使用工作曲线,将含药血浆样品中的表儿茶素及表儿茶素巯代物的药物浓度计算出来。本发明的方法快速、专属、准确、灵敏度高。

主 权 项：1.一种液质联用法检测血浆中表儿茶素及表儿茶素巯代物含量的方法，其特征是包括如下步骤：(1)含药血浆样品制备取服用含有缩合鞣质药物后的动物血浆50μL，加入10μL甲醇、20μL 100ng/mL普萘洛尔溶液、50μL 50mg/mL盐酸巯乙胺溶液，涡流混匀后，60℃水浴20min，再加入50μL甲醇，涡流混匀后，离心，取上清50μL加入50μL体积浓度为50％的甲醇水溶液,供LC/MS/MS测定；所述普萘洛尔溶液的溶剂为体积浓度为50％的乙腈-甲醇溶液；所述盐酸巯乙胺溶液的溶剂为浓盐酸和甲醇按体积比为1：9配制而成；(2)工作曲线样品的制备①标准系列溶液的配制取表儿茶素和表儿茶素巯代物的标准品储备液母液，用甲醇配置成表儿茶素和表儿茶素巯代物的浓度均为1mg/mL的储备液，再用甲醇分别稀释，得到儿茶素和表儿茶素巯代物的浓度均为50、100、250、500、1000、2500，5000和10000ng/mL；②取8份空白血浆50μL，分别加入步骤①配得的各个表儿茶素和表儿茶素巯代物的甲醇溶液10μL，配制成相当于表儿茶素和表儿茶素巯代物在血浆中的浓度为10、20、50、100、200、500，1000和2000ng/mL的样品，再分别加入20μL 100ng/mL普萘洛尔溶液、50μL50mg/mL盐酸巯乙胺溶液，涡流混匀后，60℃水浴20min，再加入50μL甲醇，涡流混匀后，离心，取上清50μL加入50μL体积浓度为50％的甲醇水溶液,供LC/MS/MS测定；所述普萘洛尔溶液的溶剂为体积浓度为50％的乙腈-甲醇溶液；所述盐酸巯乙胺溶液的溶剂为浓盐酸和甲醇按体积比为1：9配制而成；(3)LC测定条件液相色谱柱：Waters BEH Shield RP18柱，2.1mm×100mm，1.7um流动相：A：体积浓度0.1％的甲酸水溶液，B：体积浓度0.1％的甲酸乙腈溶液，梯度如下：0-1分钟，流动相A从95％到90％，流动相B从5％到10％；1-4.8分钟，流动相A从90％到84％，流动相B从10％到16％；4.8-6.3分

关 键 词：表儿茶素 工作曲线  含药血浆 内标法定量  最小二乘法  测定条件  回归方程  回归运算  空白血浆  浓度计算  普萘洛尔 权重系数  样品制备  灵敏度  儿茶素 内标物  儿茶 种液  加权  血浆 制备  检测  

IPC专利分类号：G01N30/02(20060101);G01N30/06(20060101)