文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201410833261.1

申 请 日：20141229

发 明 人：刘乃山 魏伟 迟培升

申 请 人：青岛九龙生物医药有限公司

申请人地址：266100 山东省青岛市崂山区株洲路97号

公 开 日：20150429

公 开 号：CN104558248A

语　　种：中文

摘　　要：本发明公开了一种浓缩纯化肝素钠的生产工艺，属于生物工程领域。采用扩张柱床离子交换树脂法。改变了使用传统的离子交换固定柱床吸附技术原料液中不能含有不溶性颗粒的限制，并可将肝素与杂质蛋白、核酸及其余硫酸多糖分离，浓缩，纯化一次完成。减少工序，缩短时间，降低成本，提高效率和质量。

主 权 项：1.一种浓缩纯化肝素的生产工艺，其特征在于其工艺步骤如下： （1）粗品制备： a)猪、牛、羊等哺乳动物的小肠粘膜或肝、肺等脏器的组织匀浆液中加入NaCI，搅拌、静置、过滤； b)在pH7.5-10.5，40-50℃下酶解数小时，NaOH调pH至8.0-10.0，升温至50-55℃，保温2-4h，不断搅拌，然后快速升温到92-95℃，保持10-15min，趁热用80目滤网过滤，得到滤液(I)备用； c)扩张床柱Streamline50装入已处理好的强碱性阴离子交换树脂； 控制温度40-65℃，用蠕动泵调pH为7.5-10.5，适量MTris-HCl缓冲液自柱床底部泵入，使树脂扩张并保持平衡； 保持pH值不变，将适量滤液(I)加MTris-HCl缓冲液配制成NaCI为2-6％，pH为7.5-10.5的溶液，用蠕动泵通进扩张交换柱中先平衡树脂，然后反复进行离子交换，流速约为每小时2倍柱床体积，直至流出液检验无肝素，全部吸附在树脂上为止； d)然后配制适量的的2.5-6.5％氯化钠溶液，MTris-HCl缓冲液调节pH3-5，以2～3个沉积床体积的缓冲液平衡/扩张柱床后，以5-6倍沉积床体积的缓冲液除杂，整个过程控制温度15-30℃； e)关掉蠕动泵，使D254树脂重新沉积，调节活塞至刚好在沉积床的表面，然后以向下的液流和沉积床的状态进行洗脱； f)按洗脱液体积加入1.0倍量的预冷乙醇，沉淀过夜； g)次日吸除乙醇； 沉淀物用1.5-2.5％氯化钠溶液溶解，调pH至6.0； 按溶液体积加0.7倍乙醇，沉淀过夜； h)次日虹吸上清乙醇，取出沉淀物； 沉淀物依序用无水乙醇、丙酮洗涤脱水； 真空干燥后得肝素； （2）精品制备： a)将肝素粗品以1∶10的比例溶于3％的氯化钠溶液中，然后再用2％的氢氧化钠溶液调pH至7.5-11.5，于室温静置数小时，真空抽滤，去沉淀物，滤液待用； b)在上述清液中加入0.05-0.2％胰蛋白酶，在pH7.5-10.5，35-45℃酶解数小时，升温98-100℃，1

关 键 词：离子交换树脂法 不溶性颗粒  扩张柱床  离子交换  硫酸多糖 浓缩纯化  缩短时间  一次完成  杂质蛋白  肝素钠 固定柱  原料液  肝素 核酸  吸附  一种  生产工艺 生物工程  浓缩  限制  公开  改变  减少  

IPC专利分类号：C08B37/10(20060101)