文献类型：期刊文章

作　　者：李冬妹[1] 杨磊[1] 仙玲玲[1] 谭晓华[1] 李锋[1] 应康[2] 普雄民[3] 王小波[4] 何玲[1]

机构地区：[1]石河子大学新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室,石河子832002 [2]复旦大学遗传工程国家重点实验室,上海200031 [3]新疆维吾尔自治区人民医院,乌鲁木齐830001 [4]石河子大学医学院第一附属医院皮肤科,石河子832002

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30160082)

年　　份：2005

卷　　号：25

期　　号：8

起止页码：65-69

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:分离卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)差异表达基因,并建立相应的cDNA文库,为从分子水平揭示KS发病机制打下良好基础.方法:采集KS肉瘤及来源于同一患者的正常皮肤组织,抽提总RNA,逆转录酶合成dscDNA,经Rsa I酶切,与2种不同的接头衔接,分别以正常组织和肿瘤组织作为tester和driver,进行双向抑制性差减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH),初步筛选KS肉瘤与正常皮肤差异表达基因,将差异基因PCR扩增,产物与pGEM-Teasy克隆载体连接,转化DH5α大肠杆菌,采用蓝白斑筛选,获得白色阳性克隆菌落,并煮沸破菌,PCR扩增出未知基因片段.结果:差减得到差异基因片段多位于200～500bp,成功构建了2个分别代表在KS肿瘤组织中表达上调和下调的基因文库.结论:经双向抑制性差减杂交获得了KS差异表达基因文库.抑制性差减杂交是一种快速、方便、有效的建立差异基因文库的方法.

关 键 词：KAPOSI肉瘤 抑制性差减杂交 差异基因 基因克隆  差异表达基因  基因文库 肉瘤 构建  皮肤组织  PCR扩增

分 类 号：Q959.468] Q78