文献类型：期刊文章

作　　者：王冲[1] 陈集双[1] 洪健[2] 杜志游[1] 张华荣[1] 陈绍宁[1]

机构地区：[1]浙江理工大学生物工程研究所,杭州310018 [2]浙江大学实验中心,杭州310029

出　　处：《植物病理学报》

基　　金：国家"八六三"资助项目(2002AA24112A)

年　　份：2006

卷　　号：36

期　　号：3

起止页码：204-211

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：本研究对多重PCR体系各成分和循环参数进行了摸索和优化,建立了以18S rRNA为内参照的同时检测3种百合病毒的多重RT-PCR体系,所检测的3种病毒是黄瓜花叶病毒(CMV)、百合斑驳病毒(LMoV)和百合无症病毒(LSV)。它们为侵染我国百合的主要病毒。在RT反应体系中加入3种病毒和18S rRNA的特异性反向引物的混合物,使反应体系中各反向引物终浓度均为0.5μmol/L,反转录酶(AMV)反转录合成各病毒和18S rRNA的互补第一链cDNAs。多重RT-PCR条件实验显示:将标准RT-PCR体系中的TaqHS DNA聚合酶量改为0.100 U/μL,Mg2+浓度改为4.0 mmol/L,各引物浓度选择0.2μmol/L,那么25个循环反应以上就能在一个反应管中以18S rRNA为内参照同时检测百合中的3种常见病毒。用该体系检测了10个百合样品,同时与32P同位素标记膜杂交检测作对照,结果显示,该检测体系检测灵敏度更高。

关 键 词：百合病毒  内参照  多重RT-PCR 18S  RRNA 分子检测

分 类 号：S432.41]