文献类型：期刊文章

作　　者：林健[1] 戴学军[1] 王伟民[1] 袁振华[2] 王红梅[2] 何新舟[2] 刘茜[2] 曹晖[2] 蒋立新[2]

机构地区：[1]中国人民解放军广州军区广州总医院神经外科,广东广州510010 [2]北京本元正阳基因技术有限公司,北京100176

出　　处：《中国微侵袭神经外科杂志》

基　　金：广东省自然科学基金(001122);全军医学科研"十五"计划项目(01MA038)

年　　份：2007

卷　　号：12

期　　号：8

起止页码：358-362

语　　种：中文

收录情况：CAS、IC、UPD、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的应用慢病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因转导大鼠9L胶质瘤细胞。方法构建慢病毒表达质粒pLenti6/V5-TK并以PCR、酶切及测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统,将重组质粒与包装混合物(Packaging Mix)共同转染293T细胞生产假病毒颗粒,转染48 h后收集培养上清,用其感染大鼠9L胶质瘤细胞,以抗稻瘟菌素(BSD)筛选出9L-TK细胞。RT-PCR、Western blot方法检测TK基因在9L-TK细胞中的表达。用MTT方法测试更昔洛韦(GCV)对体外培养的9L-TK细胞杀伤效果。结果构建的重组质粒pLenti6/V5-TK经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(TU)/ml。经BDS筛选获得的9L-TK细胞RT-PCR及Western blot结果显示TK基因表达阳性,且GCV对该细胞作用敏感。结论成功利用慢病毒实现了TK基因转导大鼠9L胶质瘤细胞。

关 键 词：慢病毒载体 质粒 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 大鼠  神经胶质瘤 9L细胞  

分 类 号：Q78]