文献类型：期刊文章

作　　者：林健[1] 戴学军[2] 王伟民[2] 徐如祥[1] 姜晓丹[1] 袁振华[3] 曹晖[3] 蒋立新[3]

机构地区：[1]南方医科大学珠江医院神经外科,广州510282 [2]广州军区广州总医院神经外科,广州510010 [3]北京本元正阳基因技术有限公司,北京100176

出　　处：《军事医学科学院院刊》

基　　金：广东省自然科学基金(001122);全军医学科研"十五"计划项目(01MA038)

年　　份：2007

卷　　号：31

期　　号：4

起止页码：334-337

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CSCD、CSCD2011_2012、JST、核心刊

摘　　要：目的:构建人单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的慢病毒载体质粒,并建立其慢病毒表达系统。方法:利用酶切分别获取目的基因TK片段及慢病毒pLenti6/V5载体片段,将目的基因插入载体相应酶切位点,构建pLenti6/V5-TK质粒。构建的重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定。利用慢病毒表达系统(ViraPowerTMLentiviral Ex-pression Systems),将重组质粒与包装系统质粒(pLP1,pLP2,pLP/VSVG)4质粒共转染293T细胞,48h后收集培养上清并感染大鼠胶质瘤细胞9L,抗稻瘟菌素(blasticidin,BSD)筛选9L/TK细胞。MTT方法测试更昔洛韦(ganci-clovir GCV)对体外培养的9L/TK细胞杀伤效果。结果与结论:构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(transducing units,TU)/ml。经BDS筛选的9L/TK细胞对GCV杀伤敏感。成功构建了TK基因慢病毒载体质粒pLenti6/V5-TK,并建立了其慢病毒表达系统。

关 键 词：单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 慢病毒载体 质粒 9L细胞  

分 类 号：Q78]