文献类型：期刊文章

作　　者：周昆鹏[1] 陈晓禾[1] 常丽[2] 李秀群[1] 李驯虎[2] 张珏[1,3] 邓力[1,3]

机构地区：[1]四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室,成都610041 [2]北京德得创业科技有限公司 [3]四川大学华西药学院药理系

出　　处：《中国修复重建外科杂志》

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2007AA021900);北京科学技术委员会科技计划重大资助项目(H060920050730)~~

年　　份：2009

卷　　号：23

期　　号：2

起止页码：145-150

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的探讨大鼠成骨细胞条件培养液对同种大鼠BMSCs的成骨诱导分化作用,为骨组织工程种子细胞的获得寻找一种新方法。方法健康1周龄SD大鼠10只,雌雄不限,体重20～30 g,采用贴壁法和酶消化法分别获得BMSCs和成骨细胞,并进行鉴定。无菌条件收集第1～5代成骨细胞培养液上清,与完全培养基1∶1混合,制备成骨细胞条件培养液,与第2代BMSCs共培养为诱导组,相同代次BMSCs与完全培养液共培养为对照组。倒置相差显微镜下观察共培养后BMSCs形态变化,MTT法检测BMSCs生长情况,免疫组织化学染色检测共培养后BMSCs的ALP、ColⅠ、骨钙素(osteocalcin,OCN)蛋白的表达,采用RT-PCR检测ColⅠ、OCN mRNA的表达。结果诱导组共培养7 d BMSCs体积变大,细胞由长梭形展开为扁平形和多边形,并带有突起;9 d细胞呈集落状生长。细胞生长曲线示BMSCs数量随培养时间延长而增加,对照组增殖能力较诱导组强;诱导培养4～7 d,对照组细胞数量与诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。诱导组培养12 d,ALP染色呈阳性表达;18 d出现钙结节;21 d ColⅠ和OCN呈阳性表达;对照组均呈阴性表达。RT-PCR检测示诱导组培养21 d有ColⅠ、OCN mRNA表达,对照组未见表达。结论体外大鼠成骨细胞条件培养液有明显的诱导同种大鼠BMSCs向成骨样细胞分化的作用。

关 键 词：成骨细胞条件培养液  BMSCS 诱导分化 大鼠  

分 类 号：R318[生物医学工程类]