文献类型：期刊文章

作　　者：彭巍[1] 兰志刚[1] 马晶晶[1] 王保垒[1] 张涌[1]

机构地区：[1]西北农林科技大学动物医学院生物工程研究所,杨凌712100

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2004AA213072)资助~~

年　　份：2009

卷　　号：25

期　　号：7

起止页码：968-974

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了制备高效表达人β-防御素-3基因的转基因奶牛提供可靠的核移植供体细胞,本试验采用RT-PCR从人胎盘组织获得人β-防御素3cDNA,通过双酶切法将目的基因片段hBD插入到质粒pBCP之间,最后再通过双酶切法将目的片段BCD插入到真核表达载体pEGFP-C1中,最终构建乳腺特异性表达载体pEBCD。脂质体介导法转染奶牛胎儿成纤维细胞G418,抗性筛选3-4周后,经PCR、RT-PCR扩增检测和报告基因EGFP表达检测,得到稳定整合外源基因的转基因供体细胞;同时检测稳定转染的奶牛乳腺上皮细胞系的上清液,检测到重组人β-防御素-3蛋白可以在奶牛乳腺上皮细胞组织特异性表达。

关 键 词：人β-防御素  3  奶牛β-酪蛋白  EGFP 报告基因 供体细胞 核移植

分 类 号：Q78]