文献类型：期刊文章

作　　者：李佳楠[1] 韩诗[1] 周世力[1]

机构地区：[1]江汉大学生命科学学院生物技术系,湖北武汉430056

出　　处：《江汉大学学报（自然科学版）》

基　　金：湖北省教育厅指导性项目(B20093407)

年　　份：2010

卷　　号：38

期　　号：1

起止页码：67-69

语　　种：中文

收录情况：JST、UPD、普通刊

摘　　要：目的:构建重组人神经生长因子(rh-NGF)杆状病毒表达载体,转染昆虫细胞从而获得目的蛋白的大量表达.方法:从人胎盘组织中提取细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增-NGF基因片段,经BamHI、HindⅢ双酶切后插入杆状病毒表达载体pFastBacTMDual的多克隆位点处,构建出重组载体pFastBacTM-Dual+[rh-NGF].对构建的载体进行PCR和酶切鉴定并测序.采用脂质体转染方法将表达载体转入昆虫细胞系Sf9中,通过双抗夹心ELISA对rh-NGF的表达进行检测.结果:构建的rh-NGF基因插入正确且序列与GenBank一致.ELISA检测结果显示病毒感染的Sf9细胞可表达rh-NGF.结论:成功构建出杆状病毒表达载体pFastBacTMDual+[rh-NGF],并在昆虫细胞系Sf9中得到表达,为大量制备重组人神经生长因子奠定了基础.

关 键 词：rh-NGF  杆状病毒载体 昆虫细胞表达  

分 类 号：R392.11]