文献类型：期刊文章

作　　者：林在俊[1] 肖建如[1] 罗剑[2] 黄权[1] 周振华[1] 陈素[1] 杨兴海[1] 吴志鹏[1]

机构地区：[1]上海长征医院骨肿瘤外科,200003 [2]华东师范大学生命医学研究所,上海200241

出　　处：《国际骨科学杂志》

基　　金：上海市科委基础研究重点项目(09JC1405700)

年　　份：2011

卷　　号：32

期　　号：6

起止页码：386-388

语　　种：中文

收录情况：JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建大鼠Smad6基因的慢病毒干扰载体,并在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)中验证其基因沉默效率。方法针对大鼠Smad6基因设计、合成两对Smad6-shRNA干扰序列,并将其重组到pLKO.1质粒载体中。测序验证后在HEK293T细胞内组装慢病毒。最后体外分离培养大鼠BMSC,通过慢病毒感染将Smad6干扰序列转导到细胞内,实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)及Western蛋白印迹法检测其对Smad6基因的干扰效率。结果成功构建并包装2个大鼠Smad6基因干扰的慢病毒载体和慢病毒。与阴性对照组比较,重组慢病毒感染大鼠BMSC后经实时荧光定量PCR验证,2种重组病毒的干扰效率分别达到92.5%和93.4%,Western蛋白印迹法显示Smad6基因被干扰后蛋白表达明显下降。结论成功构建出可有效干扰大鼠Smad6基因的慢病毒载体,为进一步研究其功能及应用提供有效工具。

关 键 词：Smad6基因  慢病毒 RNA干扰 基因重组 骨髓间充质干细胞

分 类 号：R363]