文献类型：期刊文章

作　　者：李红亮[1] 陈勇[2] 陈海容[2] 黄程[1] 冯一建[1] 梅翔[2] 何跃[2] 范开[1,2]

机构地区：[1]重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆400054 [2]重庆富进生物医药有限公司,重庆400041

出　　处：《中国生物制品学杂志》

基　　金：国家"十一五"重大专项候选药物(2009ZX09103-683)

年　　份：2012

卷　　号：25

期　　号：4

起止页码：422-425

语　　种：中文

收录情况：AJ、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的应用AOX1和GAP双启动子共表达体系提高人胰岛素原在毕赤酵母中的表达量。方法用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pMD18-T-HMPIDesB30质粒,回收含短C肽AAK并去掉B链第30位苏氨酸(T)的人胰岛素原类似物HMPIDesB3(0Human mini-proinsulin des B30)片段,插入pGAPZαA载体中,构建重组质粒pGAPZαA-HMPIDesB30,电转化至经质粒pPIC9K-HMPIDesB30异位整合的胰岛素原分泌菌株FJ-H(1pPIC9K-HMPIDesB30/GS115)中,应用抗生素法筛选高表达菌株,并进行发酵试验。结果重组质粒pGAPZαA-HMPIDesB30经双酶切及测序证实构建正确;经Zeocin筛选获得高表达量菌株FJ-H3。经30 L发酵罐发酵,FJ-H3菌株人胰岛素原的表达水平可达1.6 g/L,分别为FJ-H1菌株的1.6倍,FJ-H2菌株(pGAPZαA-HMP-IDesB30/GS115)的5.3倍;经质谱分析,胰蛋白酶酶切后的目的蛋白相对分子质量与理论值相符。结论利用AOX1和GAP双启动子在毕赤酵母中高效表达了人胰岛素原类似物HMPIDesB30,为实现胰岛素的规模化制备奠定了基础。

关 键 词：胰岛素原 毕赤酵母 启动子

分 类 号：Q753] Q786