文献类型：期刊文章

作　　者：陆健[1,2] 宋正海[3] 吕延飞[4] 赵福平[2] 张莉[2] 魏彩虹[2] 范广习[3] 丁家桐[1] 李碧春[1] 杜立新[2]

机构地区：[1]扬州大学动物科学与技术学院,江苏扬州225009 [2]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,国家畜禽分子遗传育种中心,北京100193 [3]苏州市吴中区东山动物防疫站,江苏苏州215128 [4]德州市畜牧兽医局,山东德州253015

出　　处：《中国畜牧兽医》

基　　金：转基因生物新品种培育重大专项--转基因肉羊育种新材料创制课题(2009ZX08008-003B)

年　　份：2012

卷　　号：39

期　　号：5

起止页码：14-19

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：Myostatin(MSTN)基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一,通过抑制肌细胞的扩增和分化而调控肌肉的生长和发育。为了进一步揭示MSTN在绵羊成纤维细胞中的生物学功能,采用RT-PCR从绵羊肌肉组织中扩增MSTN基因,将其cDNA终止密码子TGA删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-N1中,构建融合蛋白重组质粒,经XhoⅠ/SacⅡ双酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染绵羊原代成纤维细胞,观测荧光表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、蛋白质表达情况。结果表明,成功克隆绵羊MSTN基因,通过PCR方法在MSTN阅读框两端引入了XhoⅠ和SacⅡ克隆位点,成功构建pAcGFP-MSTN融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染绵羊成纤维细胞24h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,通过RT-PCR扩增出1138bp的转录产物,并用Western blotting检测到78ku目的蛋白的表达。本试验为研究MSTN基因在成纤维细胞和脂肪分化调控中的具体机制奠定基础。

关 键 词：MYOSTATIN 绵羊成纤维细胞  真核表达载体

分 类 号：Q78]