文献类型：期刊文章

作　　者：颜昕[1] 阮文雯[1] 王效民[2] 丁鑫[3] 郝兰香[3] 廖洪锋[3] 潘超[3]

机构地区：[1]厦门大学医学院临床医学系,厦门361003 [2]厦门大学附属中山医院肝胆外科,厦门361004 [3]厦门大学附属中山医院病理科,厦门361004

出　　处：《肿瘤》

年　　份：2012

卷　　号：32

期　　号：7

起止页码：507-515

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、DOAJ、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:通过化疗药物诱导建立多株人肝癌多药耐药细胞模型,探讨多药耐药获得对细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响,耐药机制及与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路表达的相关性。方法:采用多柔比星(adriamycin,ADM)高浓度冲击和小剂量缓升2种方法诱导建立人肝癌细胞(HepG2、SMMC-7721和BEL-7402)耐药模型。比较耐药细胞株与亲本细胞株间的差异,主要包括采用生物发光法进行药物敏感实验并计算耐药指数;RT-PCR法和免疫组织化学法检测相关耐药基因(P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1、肺癌耐药蛋白、乳腺癌耐药蛋白、蛋白激酶C、谷胱甘肽-S-转移酶-π和拓扑异构酶Ⅱ)mRNA及相应蛋白的表达。免疫组织化学法检测与细胞增殖活性相关的Ki-67和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达;FCM法检测细胞周期、细胞凋亡率的改变;Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力的改变;最后,分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测MAPK信号通路中ERK1、ERK2、ERK5、JNK1、JNK2和p38α基因及相应蛋白的表达。结果:共建立6株ADM耐药细胞株;与亲本细胞株相比,耐药细胞株耐药指数均>5,并对多种化疗药耐受性增强,多药耐药相关基因及蛋白的表达均上调2～10倍,以高浓度冲击法诱导的细胞中蛋白表达上调明显。耐药细胞中Ki-67及PCNA蛋白的表达量均升高20倍以上,细胞周期被阻滞在S期,体外侵袭能力增强1.3～2.5倍;ADM干预后,细胞凋亡率减少60%以上。MAPK信号通路中不同基因和蛋白表达量均有不同比例升高,以ERK1、ERK2升高明显。结论:ADM能够诱导多株人肝癌细胞产生多药耐药,导致细胞增殖活性升高、细胞周期改变、抗凋亡能力及侵袭能力增强。MAPK信号通路中相关蛋白表达的上调与细胞多药耐药有一定关系。

关 键 词：肝肿瘤  多药耐药相关蛋白类 丝裂原激活蛋白激酶类

分 类 号：R735.7]