文献类型：期刊文章

作　　者：王利平[1] 包晓辰[1] 魏玮[2] 陈洁[1] 邵宇[1] 王健民[1] 钱其军[3]

机构地区：[1]第二军医大学附属长海医院血液科 [2]中国人民解放军92474部队医院 [3]第二军医大学附属东方肝胆外科医院病毒与基因治疗实验室

出　　处：《医学研究生学报》

基　　金：国家自然科学基金(30871100)

年　　份：2012

卷　　号：25

期　　号：9

起止页码：909-914

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、IC、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的阻断可诱导共刺激途径协同骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可能能增强急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的防治作用。文中旨在构建携带小鼠可诱导共刺激分子(inducible costimula-tor,ICOS)基因的重组腺病毒载体,转染小鼠骨髓MSCs,为转基因治疗提供实验基础。方法设计含有EcoRⅠ、SalⅠ酶切位点的引物,PCR扩增ICOS,将扩增产物克隆到穿梭质粒PDC318上,筛选阳性克隆,测序鉴定正确,将其与含有5型腺病毒右臂的质粒pPE3-F11B-EGFP在293细胞中同源重组,筛选获得含有ICOS基因的重组腺病毒质粒,行PCR鉴定。重组腺病毒质粒转染293细胞,扩增后用氯化铯密度梯度离心纯化病毒,用50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度,并转染小鼠MSCs。结果重组腺病毒质粒经鉴定,证实含有ICOS基因,病毒滴度为6.54×109pfu/ml。转染小鼠MSCs,荧光显微镜下可见较多绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测ICOS表达率为90.16%。结论成功构建了携带小鼠ICOS基因的重组腺病毒载体,并获得高滴度的病毒,能高效转染小鼠MSCs,为后续研究奠定了基础。

关 键 词：腺病毒载体 可诱导共刺激分子 间充质干细胞 基因治疗

分 类 号：Q784]