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大鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ Asp128Tyr基因突变重组腺病毒载体的构建
Construction of a recombinant adenovirus vector which containing rat cardiac troponin Ⅰ Asp128Tyr gene mutation
文献类型:期刊文章
机构地区:[1]南通大学医学院组织学与胚胎学系,南通226001 [2]江苏省神经再生重点实验室 [3]南通大学附属医院心血管内科
基 金:国家自然科学基金资助项目(30971224;30971223);江苏省六大人才高峰资助项目(WS-054);江苏省"333工程"科研资助项目(BRA2012213)
年 份:2013
卷 号:33
期 号:3
起止页码:166-169
语 种:中文
收录情况:JST、普通刊
摘 要:目的:构建SD大鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ,cTnⅠ)天冬氨酸(Asp,D)128酪氨酸(Tyr,Y)突变(cTnⅠD128Y)重组腺病毒载体,并鉴定。方法:构建野生型SD大鼠cTnⅠ基因全长ORF区克隆,在此基础上,采用PCR定点突变方法对cTnⅠ第128位氨基酸位点引入D128Y突变,将野生型和突变型cTnⅠ基因亚克隆至Adeno-X腺病毒载体,转染HEK 293细胞,包装形成野生型和突变型(Ad-cTnⅠD128Y)重组腺病毒载体;并采用DNA测序、免疫印迹和细胞培养等方法进行鉴定。结果:PCR及测序结果表明,重组腺病毒克隆载体序列正确,免疫印迹证明有融合突变蛋白表达,该突变病毒转染心肌细胞见绿色荧光蛋白表达。结论:本研究成功构建了大鼠cTnⅠD128Y突变重组腺病毒载体,为探讨该突变致心肌肥大的胞内信号通路研究提供了基础。
关 键 词:心肌肌钙蛋白Ⅰ 基因突变 定点突变 重组腺病毒 大鼠
分 类 号:Q782]
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