文献类型：期刊文章

作　　者：贝抗胜[1] 吴礼杨[1] 孙庆文[2] 熊英辉[1] 杜志坡[3] 刘延晓[3]

机构地区：[1]广东省粤北人民医院/汕头大学医学院附属粤北人民医院骨科,广东省韶关市512026 [2]上海复旦大学遗传生物研究所 [3]汕头大学医学院研究生院

出　　处：《中华显微外科杂志》

基　　金：广东省韶关市科技局项目（韶科（卫）2011-24）

年　　份：2013

卷　　号：36

期　　号：5

起止页码：469-474

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CSCD、CSCD2013_2014、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的探讨细胞因子BMP4在骨膜来源细胞体外培养中的定向成软骨分化作用。方法采用人胫骨骨膜为材料，体外组织块法分离骨膜来源细胞，置于DMEM／F12完全培养基培养，倒置显微镜观察细胞形态，台盼蓝染色细胞计数法检测第3、9代骨膜来源细胞和BMP4诱导后细胞的增殖活性，绘制细胞生长曲线图。随机分为对照组、软骨诱导组和实验组，分别加入完全培养基、软骨诱导液和BMP4加软骨诱导液，第14和21天分别采用甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色检测细胞的蛋白多糖和Ⅱ型胶原；定量PCR检测软骨基因Aggrecan、Ⅱ型胶原和SOX9mRNA表达。结果（1）骨膜来源细胞在体外贴壁生长，经成软骨诱导1周后可见类圆形细胞形成，2周后细胞呈多角形，甲苯胺蓝染色呈阳性；细胞生长曲线证实诱导分化后细胞与第3代至第9代细胞增殖能力相似。（2）第14和21天软骨细胞标志物阳性率（％）实验组蛋白多糖（分别为40．29±4．29、56．74±5．12）和Ⅱ型胶原（分别为19．27±3．71、38．31±4．25）较软骨诱导组（第14和21天蛋白多糖分别为28．12±3．25、41．23±4．18，11型胶原分别为10．24±1．21、15．28±2．23）明显升高（P〈0．05）。（3）定量PCR：实验组Aggrecan（25．76-t-0．57）、Ⅱ型胶原（6．48±0．48）、SOX9（2．91±0．18）mRNA表达均明显高于软骨诱导组（11．12±0．38、2．24±0．41、1．54±0．35）和对照组（2．37±0．24、1．12±0．31、1．07±0．22）（P〈0．05）。结论骨膜来源细胞体外增殖能力强，经诱导可定向成软骨分化，BMP4在体外具有明显促进骨膜来源细胞分化为软骨细胞的作用。

关 键 词：骨膜来源细胞  成软骨分化 骨形态蛋白4  细胞培养  人  

分 类 号：R329]