文献类型：期刊文章

作　　者：邢平平[1] 刘红[1] 马惠文[2] 徐从伦[1] 成岩[1] 宋少峰[3] 仲晓宁[2] 冯东晓[1,4] 赵志伟[1,4]

机构地区：[1]山东国际生物科技园发展有限公司生物技术中心,山东烟台264670 [2]烟台市动物疫病预防与控制中心,山东烟台264003 [3]山东东方海洋科技股份有限公司,山东烟台264003 [4]滨州医学院药学院,山东烟台264003

出　　处：《生物技术通讯》

年　　份：2014

卷　　号：25

期　　号：1

起止页码：33-37

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:在大肠杆菌中可溶性表达艰难梭菌毒素B羧基端(TcdB-c),免疫产蛋鸡,获得针对TcdB-c的卵黄抗体(IgY)。方法:人工合成TcdB-c的基因,将其克隆至pET32b(+)载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达产物经金属螯合层析纯化,凝血酶酶切后得到目的蛋白TcdB-c;利用兔红细胞凝集和兔肠袢实验检测目的蛋白活性,用TcdB-c免疫产蛋鸡制备鸡卵黄抗体,分离纯化卵黄抗体并经ELISA测定抗体效价,用兔肠袢实验检测抗体的中和活性。结果:构建了TcdB-c的重组表达载体,诱导表达的融合蛋白相对分子质量约为79 000,经凝血酶酶切后的相对分子质量约65 000;目的蛋白免疫产蛋鸡后获得效价为1∶20 000的抗TcdB-c卵黄抗体,且该抗体可以中和TcdB-c对兔小肠的毒性作用。结论:获得了具有生物学活性的TcdB-c,并制备了针对TcdB-c的鸡卵黄抗体,为利用基因工程方法防治艰难梭菌感染打下了基础。

关 键 词：艰难梭菌毒素B羧基端  原核表达 卵黄抗体

分 类 号：Q78] R392.1]