文献类型：期刊文章

作　　者：区炳明[1,2] 陈琳[1,2,3] 宋玉洁[1,2] 王小舟[1,2] 张倩[1,2] 陈秀芳[4] 朱国强[1,2]

机构地区：[1]扬州大学兽医学院,江苏扬州225009 [2]江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009 [3]江苏农牧科技职业学院,江苏泰州225300 [4]江苏省金坛市畜牧兽医站,江苏金坛213241

出　　处：《中国预防兽医学报》

基　　金：国家自然科学基金(30571374;30771603;31072136;31270171);教育部创新团队和江苏高校优势学科建设工程资助;第54批中国博士后科学基金(2013M541740)

年　　份：2015

卷　　号：37

期　　号：6

起止页码：448-452

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：为探索大肠杆菌(E.coli)16S r RNA甲基化酶耐药基因rmt B在菌体形成氨基糖苷类抗生素抗性中的作用,本研究以rmt B阳性菌E.coli 3A11-16作为亲本株,经PCR扩增其上下游序列作同源臂序列,分别克隆于p BluescriptⅡKS+中,构建p Blue-Δrmt B,其rmt B基因中缺失的30 bp由质粒中多克隆位点的18 bp替换,以XbaⅠ/KpnⅠ酶切p Blue-Δrmt B,目的片段亚克隆于自杀性载体p DMS197中,构建p DMS-Δrmt B,电转化至野生菌E.coli3A11-16,筛选获得rmt B基因缺失株E.coli 3A11-16Δrmt B。同时将rmt B基因插入p BR322中转化于基因缺失株构建其回补株。微量稀释法分别测定rmt B亲本株、基因缺失株和回补株对氨基糖苷类抗生素的耐药性。PCR和测序结果显示rmt B基因缺失株构建正确,证明通过自杀性载体能够对质粒中的基因进行改造。药敏试验显示相对于亲本株,基因缺失株对4,6-二脱氧链霉胺类氨基糖苷抗生素耐药性降低至质控菌水平,表明16S r RNA甲基化酶rmt B基因是介导大肠杆菌对4,6-二脱氧链霉胺类氨基糖苷类抗生素高度耐药的重要基因。本实验通过构建rmt B基因缺失株,为进一步研究rmt B阳性菌生物学功能及其在E.coli中的耐药机制奠定了基础。

关 键 词：rmtB  自杀性载体  rmtB基因缺失株  接合性质粒  氨基糖苷类

分 类 号：S852.61]