文献类型：期刊文章

作　　者：郭晋霞[1] 何云凤[1] 范开[2]

机构地区：[1]重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆400054 [2]重庆富进生物医药有限公司,重庆400050

出　　处：《重庆理工大学学报（自然科学）》

年　　份：2016

卷　　号：30

期　　号：2

起止页码：77-83

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：提出了重组毕赤酵母工程菌p PICZ-DT30/GS115基因组中外源基因DT30拷贝数的实时荧光定量PCR方法。该重组工程菌用来表达人胰岛素前体(PI-DT30),其表达量的高低、菌种稳定性对工艺研究及整体项目成本等有重大影响。外源基因拷贝数是检测表达量的一个重要指标。该方法中,利用毕赤酵母的看家基因GAP(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)为内参,分别建立含GAP基因和DT30基因的双标准曲线。将工程菌基因组进行荧光定量PCR,根据标准曲线和Ct值计算目的基因DT30在重组毕赤酵母工程菌中的拷贝数,结果为7个。

关 键 词：荧光定量PCR  表达  胰岛素前体  基因拷贝数

分 类 号：Q39]