文献类型：期刊文章

作　　者：骆云慧[1] 石坚[1,2] 方磊[1] 孟庆珍[1] 张鑫[1] 钱冬[1]

机构地区：[1]宁波大学,浙江宁波315211 [2]杭州三合创新科技有限公司,浙江杭州310020

出　　处：《中国兽医科学》

基　　金：浙江省科技厅项目(2013C32SA1G0002)

年　　份：2016

卷　　号：46

期　　号：7

起止页码：847-852

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：为建立一种灵敏、特异、快速地检测虾肝肠胞虫的方法,以虾肝肠胞虫的保守序列为靶序列,利用Primer Premier 5.0和Primer Express 2.0软件分别设计引物和TaqMan探针,开展了虾肝肠胞虫的TaqMan荧光定量PCR检测技术研究。将虾肝肠胞虫目标片段克隆到p MD 19-T载体上构建重组质粒,然后以10倍梯度稀释的重组质粒作为标准品。根据标准品拷贝数与Ct值的关系绘制标准曲线,其斜率为-3.239,相关系数r^2=0.996。重复性试验结果表明,该方法 Ct值的变异系数为0.94%~1.13%,具有良好的稳定性。特异性检测结果显示,该方法对白斑综合征病毒、传染性皮下及造血组织坏死病毒、高致病性副溶血弧菌、微孢子虫感染的对虾肌肉组织等的检测结果均为阴性,表明无交叉反应,具有良好特异性。应用建立的方法对宁波和嘉兴地区15批凡纳滨对虾样品进行检测,发现有6批感染虾肝肠胞虫。利用标准曲线对感染虾肝肠胞虫的虾不同组织进行了定量分析。本研究建立的虾肝肠胞虫TaqMan荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对虾肝肠胞虫病的快速诊断与病原定量检测有重要意义,可广泛应用于实验室和现场快速检测。

关 键 词：凡纳滨对虾 虾肝肠胞虫  TAQMAN 荧光定量PCR

分 类 号：S852.723]