文献类型：期刊文章

作　　者：张龙真[1] 郭佳[1,2] 顾华[1] 房健民[1]

机构地区：[1]同济大学生命科学与技术学院,上海200092 [2]烟台荣昌制药股份有限公司,山东烟台264006

出　　处：《合肥工业大学学报（自然科学版）》

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金资助项目(81402399);中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(2000219121);江苏省自然科学基金资助项目(BK2012162)

年　　份：2017

卷　　号：40

期　　号：6

起止页码：835-839

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、JST、MR、RCCSE、ZGKJHX、ZMATH、核心刊

摘　　要：文章采用兼并引物逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)从特异性分泌抗人c-Met阻断型单克隆抗体的杂交瘤细胞株3E1D7中扩增抗体重、轻链可变区基因(V_H和V_L)。通过重叠延伸PCR(splice overlap extension PCR,SOE-PCR)方法分别将鼠源V_H与人IgG1的重链恒定区基因Cγ1相连,鼠源V_L与人IgG1的轻链恒定区基因Cκ相连获得嵌合抗体重链基因(H)和轻链基因(L)。将嵌合抗体重、轻链基因连接到慢病毒表达载体中,经双酶切和测序鉴定成功构建了慢病毒表达质粒pRRL-CMV-ch3E-H和pRRL-CMVch3E-L。磷酸钙法转染293T细胞,表达的嵌合抗体经Protein A Sepharose 4B亲和层析柱纯化,通过SDSPAGE检测抗体的完整性,ELISA法检测嵌合抗体的特异性抗原结合活性及人源性。感染慢病毒的293T细胞上清纯化后,经SDS-PAGE分析,可见25kDa嵌合抗体轻链和50kDa的嵌合抗体重链蛋白。且纯化后的嵌合抗体能够与c-Met抗原特异性结合成功获得重组抗人c-Met嵌合抗体,该抗体减少了鼠源成分,降低了免疫原性,利用慢病毒可以快速获得大量重组抗体蛋白,为该抗体药物的体内外评估奠定基础。

关 键 词：抗人间质表皮转化因子  肝细胞生长因子 嵌合抗体 慢病毒表达载体 生物学活性  

分 类 号：Q786]