文献类型：期刊文章

作　　者：李琦[1,2,3] 成莉凤[1] 段盛文[1] 冯湘沅[1] 郑科[1] 杨琦[1] 刘志远[1] 彭源德[1]

LI Qi;CHENG Lifeng;DUAN Shengwen;FENG Xiangyuan;ZHENG Ke;YANG Qi;LIU Zhiyuan;PENG Yuande(Institute of Bast Fiber Crops,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Changsha 410205,China;Hunan Lerkam Biology Co.,Ltd.,Yueyang 414100,China;College of Plant Protection,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,China)

机构地区：[1]中国农业科学院麻类研究所,湖南长沙410205 [2]湖南利尔康生物股份有限公司,湖南岳阳414100 [3]湖南农业大学植物保护学院,湖南长沙410128

出　　处：《华北农学报》

基　　金：国家自然科学基金项目(31700438);湖南省自然科学基金项目(2016jj3126);国家创新工程(ASTIP-IBFC08);国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-16-E22);湖南省战略性新兴产业科技攻关和重大科技成果转化项目(2014GK1041)

年　　份：2018

卷　　号：33

期　　号：4

起止页码：126-130

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CSCD、CSCD2017_2018、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了获得新型木聚糖酶的高效分泌表达,在工程酶项目组前期原核表达了木聚糖酶基因xyn A的基础上,将xyn A基因(Gen Bank登录号:U57819)编码耐热性木聚糖酶成熟蛋白的部分序列克隆到p PICZαA表达载体上,转化毕赤酵母X33,成功构建真核表达体系,再分批加入0. 5%(V/V)甲醇诱导毕赤酵母工程菌株产胞外木聚糖酶。结合木聚糖酶活力检测、SDS-PAGE电泳和Western Blot分析胞外木聚糖酶表达情况。结果表明,该XynA含有典型的糖苷水解酶11类催化结构域(GH11),成熟蛋白的预测分子量为38. 6 ku,等电点为6. 86; 7个毕赤酵母基因工程菌株X33/p PICZαA-xyn A分泌的木聚糖酶活力均≥300 U/m L,最高达487. 2 U/m L;胞外木聚糖酶在SDS-PAGE和Western Blot检测的特征谱带分子量约为45 ku,均比预期分子量(38. 6 ku)略大。一种新型木聚糖酶获得了高效分泌表达,为进一步分离纯化,研究其性质、结构和功能奠定了基础。

关 键 词：木聚糖酶基因 毕赤酵母 真核表达 WESTERN BLOT

分 类 号：S330] Q78]