文献类型：期刊文章

作　　者：李淑华[2] 高丽莲[3] 陈系古[4] 付强[3] 张齐好[1]

LI Shu-hua;GAO Li-lian;CHEN Xi-gu;FU Qiang;ZHANG Qi-hao(Institute of Biomedicine, and National Engineering Research Center of Genetic Medicine, College of Life Science and Technology,Jinan University, Guangzhou 510632, China;Guangzhou Women and Children’s Medical Center, Guangzhou 510623, China;The First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 510632, China;Center of Experimental Animals, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510800, China)

机构地区：[1]暨南大学生命科学技术学院生物医药研究院,广东广州510632 [2]广州市妇女儿童医疗中心,广东广州510623 [3]暨南大学第一附属医院,广东广州510632 [4]中山大学实验动物中心,广东广州510080

出　　处：《中国病理生理杂志》

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(No.2018A030313035)

年　　份：2019

卷　　号：35

期　　号：6

起止页码：1118-1123

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:探讨悬滴培养诱导稳定表达人肝细胞生长因子(hHGF)的大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)向肝样细胞分化的效应。方法:体外分离和培养rMSCs,采用流式细胞术检测干细胞表面标志分子CD44、CD90、CD34和CD45的表达率;构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-hHGF,包装病毒感染rMSCs,获得稳定表达hHGF的细胞株hHGF-rMSCs;分别对rMSCs和hHGF-rMSCs进行悬滴培养,在培养第7、14和21天,通过RT-qPCR和免疫荧光技术检测白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(APF)和角蛋白18(CK-18)在mRNA和蛋白水平上的表达,此外,还利用ELISA的方法检测培养液上清中ALB的分泌。结果:第3代rMSCs高表达CD44和CD90,几乎不表达CD34和CD45;构建表达载体后,成功建立了hHGF-rMSCs细胞株,且经过悬滴培养后,在第7~21天都呈现ALB、AFP和CK-18在mRNA水平上的高表达(P<0.01);免疫荧光结果显示,AFP蛋白在第21天出现阳性表达,而ALB和CK-18蛋白在第7天就呈现阳性表达;在第7~21天,ELISA法均检测到hHGF-rMSCs细胞培养上清中ALB的分泌增多(P<0.01)。结论:将HGF基因导入rMSCs,经悬滴培养可诱导分化为肝样细胞,可能为临床肝脏疾病的细胞治疗和体外生物人工肝提供新型种子细胞。

关 键 词：骨髓间充质干细胞 悬滴培养  肝细胞生长因子 肝样细胞

分 类 号：R329.2] R363.2[基础医学类]