文献类型：期刊文章

作　　者：仇书兴[1] 殷星[1] 苏淑娟[2] 殷俊磊[1] 张家友[3] 刘雪贺[1] 贾坤义[1] 杨晓明[3]

QIU Shu-xing;YIN Xing;SU Shu-juan;YIN Jun-lei;ZHANG Jia-you;LIU Xue-he;JIA Kun-yi;YANG Xiao-ming(College of Medicine,Xinxiang University,Xinxiang 453003;The Third Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University,Xinxiang 4530033;China National Biotec Group Company Limited,Beijing 100000)

机构地区：[1]新乡学院医学院,新乡453003 [2]新乡医学院第三附属医院,新乡453003 [3]国药集团中国生物技术股份有限公司,北京100000

出　　处：《生物技术通报》

基　　金：河南省科技攻关计划项目(182102310091)

年　　份：2019

卷　　号：35

期　　号：12

起止页码：85-93

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：旨为以原核表达系统表达、纯化新型H7N9禽流感病毒(安徽株)NA蛋白胞外区片段并制备该蛋白的多克隆抗体。对新型H7N9禽流感病毒神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)蛋白胞外区片段进行生物信息学分析,基于大肠杆菌密码子偏爱性进行密码子优化并合成该蛋白编码基因。将构建的重组质粒pET28b-tN9(Truncated N9)转化至E.coli BL21(DE3)、E.coli Rosetta和E.coli Arctic Express(DE3),进行诱导表达,并进行SDS-PAGE鉴定。选取E.coli BL21(DE3)重组菌进行放大培养、IPTG诱导并对诱导产物进行镍柱纯化、SDS-PAGE分析和质谱鉴定。将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以Western blotting和间接ELISA法检测抗体特异性及效价。成功表达并纯化目标蛋白,Western blotting显示制备的多克隆抗体能特异性识别重组蛋白和新型H7N9禽流感病毒(上海株),间接ELISA方法检测制备的多克隆抗体,效价为1∶256000。利用原核表达系统高效表达并纯化了tN9蛋白,制备的多克隆抗体效价高,特异性强,旨为深入探索NA蛋白结构及功能、H7N9禽流感病毒致病机制和建立快速检测方法奠定基础。

关 键 词：H7N9禽流感病毒  生物信息学 NA蛋白胞外区  亲和纯化  多抗

分 类 号：S85[动物医学类]