文献类型：期刊文章

作　　者：戚百川[1] 杨金钱[1] 丁文文[1] 马艳杰[1] 李健[1,3] 陈坤鹏[1] 薛云[1] 司丽芳[1,2] 刘志军[1,2] 赵战勤[1,2]

QI Bai-chuan;YANG Jing-Qian;DING Wen-Wen;MA Yan-jie;LI Jian;CHEN Kun-Peng;XUE Yun;SI Li-fang;LIU Zhi-jun;ZHAO Zhan-qin(Laboratory of Veterinary biologics Engineering,College of Animal Science and Technology,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471023,China;Key-Disciplines Lab of safety of environment and Animal Product,College of Animal Science and Technology,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471023,China;Fujian Provincial Key Laboratory for the Prevention and Control of Animal Infectious Diseases and Biotechnology,College of Life Sciences,Longyan University,Longyan 364012,China)

机构地区：[1]河南科技大学动物科技学院/兽医生物制品工程实验室,河南洛阳471023 [2]河南科技大学动物科技学院/河南省高等学校环境与畜产品安全重点学科开放实验室,河南洛阳471023 [3]龙岩学院生命科学学院/福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室,福建龙岩364012

出　　处：《中国预防兽医学报》

基　　金：国家自然科学基金项目(32072899、U1704117);福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室开放基金课题项目(2019KF01)。

年　　份：2021

卷　　号：43

期　　号：8

起止页码：880-884

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2021_2022、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为制备和筛选副猪嗜血杆菌(HPS)具有免疫保护效力的抗原因子重组蛋白,本研究根据GenBank中已登录HPS基因序列,设计引物,分别克隆其OapA、Hps0675(包括全片段和2个子片段)、Hsp60、OmpP2、HbpB、GAPDH、Hps06257和D15抗原因子的10个基因片段,分别将其克隆入pET28a质粒构建重组表达质粒并转化大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测结果显示,除OapA外,其他9个重组蛋白均正确表达,其表达量占菌体总蛋白的10.20%~31.90%。除rGAPDH以可溶性和包涵体两种形式表达外,其他8个重组蛋白均以包涵体形式存在。Western blot鉴定结果显示,rHbpB、rD15、rHps06257反应原性最强,rGAPDH、rHsp60、rOmpP2反应原性中等,r Hps0675-1、r Hps0675-2、rHps0675反应原性最弱。以His标签蛋白纯化试剂盒纯化后,9个重组蛋白的纯度在90.72%~98.72%,浓度在1.082 mg/mL~7.936 mg/mL。本研究实现了HPS 9个重要抗原因子的克隆表达和纯化,首次在相同条件下对其反应原性进行了对比分析,为其亚单位疫苗候选保护性抗原蛋白的筛选奠定基础。

关 键 词：副猪嗜血杆菌 免疫原性蛋白  表达  纯化  Western blot  

分 类 号：S852.4]