文献类型：期刊文章

作　　者：余真妍[1] 杨洪宾[1] 纪帅帅[1] 刘阳[2] 霍强[1]

YU Zhenyan;YANG Hongbin;JI Shuaishuai;LIU Yang;HUO Qiang(Department of Medicinal Chemistry,School of Pharmacy,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China;Department of Pharmaceutics,School of Pharmacy,Nanjing Medical University)

机构地区：[1]蚌埠医学院药学院药物化学教研室,蚌埠233030 [2]南京医科大学药学院药剂学教研室

出　　处：《山西医科大学学报》

基　　金：安徽省教育厅重大项目(KJ2020ZD52)。

年　　份：2021

卷　　号：52

期　　号：12

起止页码：1590-1596

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的体外培养C57BL/6小鼠关节软骨细胞,建立符合骨关节炎实验需求的凋亡模型。方法采用两步酶消化配合机械吹打法分离C57BL/6小鼠关节软骨细胞,倒置相差显微镜分别观察5代软骨细胞的形态及生长情况,甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞,CCK-8法分别检测5代软骨细胞的活力情况,实时荧光定量(RT-PCR)法分别检测5代软骨细胞中Ⅱ型胶原mRNA的变化。在培养基中加入不同浓度(0,5,10,20μmol/L)的星形孢菌素及200μmol/L H_(2)O_(2)作用24 h,通过检测细胞凋亡率,选择合适的浓度,并利用AOEB法进一步验证10μmol/L星形孢菌素的促凋亡作用。结果体外培养的C57BL/6小鼠关节软骨细胞,第1代类圆形,第2代三角形,第3代三角形及短梭形,3代后软骨细胞主要呈长梭形且形态不规则,胞核增大,胞质边缘模糊化。经甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光染色证实为软骨细胞。与第1代软骨细胞相比,第4代和第5代软骨细胞的细胞活力显著降低(均P<0.05)。与第1代软骨细胞相比,第4代和第5代软骨细胞的Ⅱ型胶原mRNA相对表达量显著降低(均P<0.001)。与H_(2)O_(2)阳性对照相比,10μmol/L星形孢菌素作用软骨细胞24 h凋亡率为(63.97±1.67)%,差异无统计学意义。AOEB结果显示,与正常细胞相比,10μmol/L星形孢菌素作用软骨细胞后,凋亡早期细胞核质体呈绿色,细胞形状不规则;凋亡晚期细胞,核质体呈橙色,细胞核碎裂成点状,大小不一。结论本研究成功培养了C57BL/6小鼠关节软骨细胞,10μmol/L星形孢菌素作用3代内软骨细胞24 h建立凋亡模型最适宜。

关 键 词：软骨细胞 星形孢菌素  原代细胞培养 细胞鉴定

分 类 号：Q813.11[生物工程类]