期刊文章详细信息
稳定表达未折叠蛋白反应荧光报告基因的SH-SY5Y细胞系建立
Stable establishment of SH-SY5Y cell line expressing unfolded protein response fluorescence reporter gene
文献类型:期刊文章
SUN Jian-Qiang;ZHU Wei;CHEN Yu(School of Basic Medicine and Forensic Medicine,Baotou Medical College,Baotou 014040,Inner Mongolia,China)
机构地区:[1]包头医学院基础医学与法医学院,内蒙古包头014040 [2]包头医学院第四附属医院,内蒙古包头014040 [3]包头医学院药学院,内蒙古包头014040 [4]包头医学院内蒙古自治区低氧转化医学重点实验室,内蒙古包头014040 [5]包头医学院医学技术与麻醉学院,内蒙古包头014040 [6]包头医学院图书馆,内蒙古包头014040
基 金:国家自然科学基金项目(81901918,81660204);内蒙古自然科学基金(2019MS08060);2020年中央引导地方发展基金(2020ZY0040);2017年度内蒙古自治区“草原英才”工程青年创新创业人才(Q2017047);2022年度内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJZY22062)。
年 份:2023
卷 号:43
期 号:23
起止页码:5757-5763
语 种:中文
收录情况:BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、IC、JST、RCCSE、核心刊
摘 要:目的通过稳定表达70 kD热休克蛋白(HSP)4重组蛋白(HSPA4)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的SH-SY5Y细胞系,直观实时反映细胞内未折叠蛋白反应(UPR)的变化。方法以SH-SY5Y细胞的cDNA为模板,克隆HSPA4,并连接EGFP。将HSPA4-EGFP连接入慢病毒载体中,慢病毒转染SH-SY5Y细胞。使用3μg/ml嘌呤霉素处理细胞1个月,筛选得到HSPA4-EGFP稳转系。通过实时荧光定量聚合酶链反应(QPCR)、Western印迹、共聚焦显微镜检测等方法,证实HSPA4-EGFP稳转系能有效且实时反映UPR的变化。结果扩增到HSPA4-EGFP,并成功构建HSPA4-EGFP稳定表达的UPR报告系统。QPCR检测表明,构建的报告系统可以指示UPR。在激光共聚焦显微镜下,可以观察到细胞内绿色EGFP的点状分布,其能够反映UPR错误折叠蛋白的多少及分布,分别加入UPR激活剂、抑制剂后,细胞内绿色EGFP的点状分布明显增多和减少,差异有统计学意义(P<0.05)。Western印迹检测到细胞中HSPA4-EGFP融合蛋白表达条带。结论成功构建HSPA4-EGFP稳转系,能够直观实时反映UPR变化,为深入研究UPR及其相关疾病(包括老年性疾病)提供工具。
关 键 词:未折叠蛋白反应(UPR) 70 kD热休克蛋白4重组蛋白(HSPA4)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP) SH-SY5Y细胞
分 类 号:Q786]
参考文献:
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