文献类型：期刊文章

作　　者：万仕成[1] 张梦菲[1] 陈文博[1] 韩苗[1] 杨栋慧[1] 王聪亮[1] 吴文萍[1] 王瑜琪[1] 李娜[1] 朱海鲸[2] Ahmed Hamed Arisha[3] 华进联[1]

WAN Shicheng;ZHANG Mengfei;CHEN Wenbo;HAN Miao;YANG Donghui;WANG Congliang;WU Wenping;WANG Yuqi;LI Na;ZHU Haijing;Ahmed Hamed Arisha;HUA Jinlian(Shaanxi Stem Cell Engineering and Technology Research Center,College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling 712100,Shaanxi,China;Shaanxi Province Engineering&Technology Research Center of Cashmere Goats,Yulin University,Yulin 719000,Shaanxi,China;Faculty School of Veterinary Medicine,Badr University in Cairo,Badr 11829,Cairo,Egypt)

机构地区：[1]西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心,陕西杨凌712100 [2]榆林学院陕西省绒山羊工程技术研究中心,陕西榆林719000 [3]开罗班达尔大学兽医学院,开罗班达尔11829

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家自然科学基金(32072806);国家重点研发计划(2022YFD1302201);陕西省畜牧科技示范和畜牧专项项目(20221086,20230978)。

年　　份：2023

卷　　号：39

期　　号：12

起止页码：4901-4914

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2023_2024、EAPJ、EMBASE、JST、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：随着基因编辑技术迅速发展,研究精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)对精子发生及其调控机制研究、转基因动物研发、基因治疗和不孕不育症的治疗以及珍稀物种的保护均具有重要意义。溶酶体相关细胞器生物合成复合体1亚基1(biogenesis of lysosome-related organelles complex 1subunit 1,BLOC1S1)具有抗布鲁氏菌的潜能,研究BLOC1S1对山羊SSCs的影响不仅能探究BLOC1S1促进SSCs增殖的能力,还能为其抗病育种研究提供细胞学基础。本研究通过同源重组构建BLOC1S1过表达载体,通过慢病毒包装、转染与嘌呤霉素筛选成功构建了山羊精原干细胞BLOC1S1过表达细胞株。通过实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测BLOC1S1的过表达效率为18倍,同时细胞生长曲线、流式细胞术检测细胞周期、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)染色等实验结果表明,BLOC1S1能显著增加山羊SSCs的增殖活性。RT-qPCR、免疫荧光染色、Western blotting结果显示与增殖相关的基因(PCNA、CDK2、CCND1)上调,同时调控精原干细胞增殖的关键基因EIF2S3Y的表达量也上调。本研究成功构建了山羊精原干细胞BLOC1S1过表达细胞株,提高其增殖能力,并且这种促增殖能力可能是通过EIF2S3Y/ERK通路实现的。本研究为探究BLOC1S1对山羊精原干细胞的调控作用奠定了细胞学基础,并为进一步研究BLOC1S1的生物学功能提供细胞平台,为繁育BLOC1S1修饰抗病山羊奠定了基础。

关 键 词：山羊 溶酶体相关细胞器生物合成复合体1亚基1(BLOC1S1)  精原干细胞 增殖

分 类 号：S827]