文献类型：期刊文章

作　　者：陈林文[1,2] 冀伟[3] 曹龙龙[1,2] 王莹[1] 李秋燕[1,2] 曹胜波[2] 陈清秀[1] 周登元[1,2]

CHEN Lin-wen;JI Wei;CAO Long-long;WANG Ying;LI Qiu-yan;CAO Sheng-bo;CHEN Qing-xiu;ZHOU Deng-yuan(Wuhan Keqian Biology Co.,Ltd.,Wuhan 430070,China;College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China;Zhejiang Hisun Animal Healthcare Products Co.,Ltd.,Hangzhou 311400,China)

机构地区：[1]武汉科前生物股份有限公司,湖北武汉430070 [2]华中农业大学动物医学院,湖北武汉430070 [3]浙江海正动物保健品有限公司,浙江杭州311400

出　　处：《中国预防兽医学报》

基　　金：湖北省实验动物研究领域项目(2023CFA005)。

年　　份：2023

卷　　号：45

期　　号：11

起止页码：1141-1147

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2023_2024、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为建立一种能够快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的三重荧光定量RT-PCR方法,本研究根据FPV VP2基因、FCV ORF2基因和FHV-1 TK基因分别设计引物与探针,采用上述引物经PCR分别扩增上述3种病原的目的基因并克隆至pMD18-T载体中,构建重组质粒标准品pMD18-T-FPV、pMD18-T-FCV和pMD18-T-FHV-1,并均经PCR和测序鉴定。将3种重组质粒标准品稀释到同一浓度1×10^(8)拷贝/μL,按体积比1∶1∶1混合后作为模板,采用方阵法优化各反应条件后,建立了检测上述病原的三重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。以FPV、FCV、FHV-1、猫博卡病毒、猫冠状病毒、猫支原体、猫白血病病毒、猫星状病毒的基因组为模板采用本研究建立的方法检测,评估该方法的特异性,结果显示,该方法仅能检测到FPV、FCV、FHV-1,而其他病原的检测结果均为阴性。选取1×10^(0)拷贝/μL~1×10^(6)拷贝/μL的混合质粒标准品和10^(-0.5) TCID_(50)/mL~10^(5.5) TCID_(50)/mL的混合病毒液分别作为模板,采用本研究建立的方法检测,评估该方法检测重组质粒和病毒的敏感性,结果显示,该方法对重组质粒标准品pMD18-T-FPV、pMD18-T-FCV和pMD18-T-FHV-1的检测限均为1.0×10^(1)拷贝/μL,对3种病毒的检测限均约为10^(0.5) TCID_(50)/mL;以1×10^(7)拷贝/μL、1×10^(5)拷贝/μL、1×10^(3)拷贝/μL质粒标准品混合物作为模板分别进行组内和组间的重复性试验,结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数(CV)均低于3%。利用建立的该三重荧光定量RT-PCR和常规PCR对81份临床样品(77份猫的眼、鼻、咽、肛混合拭子样品和4份组织病料样品)分别检测,结果显示三重荧光定量RT-PCR检测出47份FPV、13份FCV和13份FHV-1阳性样品,而常规PCR分别检测出39份FPV、9份FCV和6份FHV-1阳性样品,该三重荧光定量RT-PCR与FPV、FCV、FHV-1常规PCR的总符合率分别为90.12%、95.06%、92.59%。本研究

关 键 词：猫泛白细胞减少症病毒 猫杯状病毒  猫疱疹病毒1型  三重荧光定量RT-PCR  

分 类 号：S852.65]