文献类型：期刊文章

作　　者：杜金格[1] 蒋华英[1] 何平[1] 王春梅[1]

DU Jinge;JIANG Huaying;HE Ping;WANG Chunmei(Department of Biopharmaceuticals,School of Life Science,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China)

机构地区：[1]北京中医药大学生命科学学院生物制药系,北京100029

出　　处：《生物加工过程》

基　　金：中央高校基本科研业务费(2020-JYB-ZDGG-054);北京中医药大学新奥基金(2019);北京中医药大学科研发展基金。

年　　份：2025

卷　　号：23

期　　号：3

起止页码：262-267

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：在工业生产中,地龙蚓激酶的原料处理方法对最终蚓激酶的质量和活性有很大影响,但缺乏具体的研究数据。本文研究了粗酶液的制备方法,以期为地龙蚓激酶生产工艺优化提供参考。分别采用浸泡匀浆、去上清匀浆、浸泡上清和打粉浸泡4种方法从干地龙中制备蚓激酶粗酶液,通过考马斯亮蓝法测定蛋白含量,纤维蛋白平板法检测酶活力,SDS-PAGE电泳法和凝胶过滤色谱法探究粗品不同分子量蛋白分布。结果表明:浸泡上清法制得的粗酶液比酶活较高,可达18233U/mg;打粉浸泡法制得的粗酶液总酶活较高,每克干品所得蚓激酶总酶活为693593U,电泳显示2个浸泡组所得蛋白分子量集中于(25~35)×10^(4)。浸泡匀浆法和去上清匀浆法制得的粗酶液总酶活和比酶活均较低,所得总蛋白中小分子量蛋白(<10×10^(4))的含量较高。凝胶过滤色谱图显示,浸泡上清和打粉浸泡组的蛋白活性峰的峰面积大于2个匀浆组。此外,温度稳定性实验表明,匀浆法所得蚓激酶更容易高温失活。获得高比酶活粗酶的制备方法是浸泡上清法,适用于进一步的分离纯化;粗酶得率较高的制备方法是打粉浸泡法,适用于工业生产;匀浆提取操作显著降低了干地龙蚓激酶活性。

关 键 词：地龙 匀浆 蚓激酶 纤维蛋白平板法  凝胶过滤 蛋白电泳

分 类 号：R283[中药学类] Q814[中医学类]