文献类型：期刊文章

作　　者：张飞飞[1] 李健[1] 许祥影[1] 韩美玲[1] 张赭[1]

ZHANG Feifei;LI Jian;XU Xiangying;HAN Meiling;ZHANG Zhe(College of Anesthesiology,Xuzhou Medical University,Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesiology,Xuzhou 221004,China)

机构地区：[1]徐州医科大学麻醉学院,江苏省麻醉学重点实验室,江苏徐州221004

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(81471314);江苏省高等学校自然科学研究(17KJD180006)。

年　　份：2025

卷　　号：41

期　　号：6

起止页码：544-551

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2023、核心刊

摘　　要：目的原核表达小鼠白血病相关蛋白16(LRP16)蛋白中第59至145位氨基酸的抗原序列并制备兔抗小鼠LRP16多克隆抗体。方法利用分子克隆法构建原核表达质粒pLS962-LRP16,转入E.coli Rosetta,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达LRP16蛋白。采取Ni-NTA亲和柱和分子筛柱进行重组蛋白的纯化。用纯化后的LRP16蛋白作为抗原,免疫新西兰兔制备抗血清,并用ELISA测定抗体滴度。抗血清经抗原亲和纯化后,用Western blot及免疫荧光法进行鉴定。结果SDS-PAGE显示LRP16融合蛋白成功表达,且以包涵体的形式表达;ELISA结果表明多克隆抗体效价高达1∶256000;Western blot和免疫荧光法均显示该多克隆抗体能够特异性识别内源性的LRP16蛋白。结论成功实现LRP16基因的原核表达,并制备特异性较好的兔抗小鼠LRP16多克隆抗体,为深入研究LRP16基因的功能奠定基础。

关 键 词：LRP16蛋白  原核表达 亲和层析  多克隆抗体

分 类 号：R392] Q786[基础医学类] R392.11]