文献类型：期刊文章

作　　者：廉乐乐[1] 袁橙[1] 郝福星[1] 汤芳[2] 陆辉[1] 薛峰[2] 戴建君[2]

LIAN Le-le;YUAN Cheng;HAO Fu-xing;TANG Fang;LU Hui;XUE Feng;DAI Jian-Jun(College ofAnimalMedicine,JiangsuAgri-animal Husbandry Vocational College,Taizhou 225300,China;MOE Joint International Research Laboratory ofAnimal Health and Food Safety,College of VeterinaryMedicine,NanjingAgricultural University,Nanjing 210095,China)

机构地区：[1]江苏农牧科技职业学院动物医学院,江苏泰州225300 [2]南京农业大学动物医学院动物健康与食品安全国际合作联合实验室,江苏南京210095

出　　处：《中国预防兽医学报》

基　　金：江苏农牧科技职业学院(NSF2022CB13);江苏省高等学校自然科学研究面上项目(21KJB230007);泰州市科技支撑计划(农业)项目(TN202118)。

年　　份：2025

卷　　号：47

期　　号：4

起止页码：418-423

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2023、核心刊

摘　　要：为分析本研究前期分离的大肠杆菌噬菌体Hab-EA株是否编码裂解酶(Lysin)基因,且该裂解酶蛋白是否对大肠杆菌(E.coli)具有杀菌活性,本研究根据GenBank中大肠杆菌噬菌体lysin基因序列,采用Primer 5设计简并引物,经PCR扩增Hab-EA株的假定裂解酶(称为lysEha1)基因并测序,分别采用ORF Finder和BLAST分析该基因的ORF,采用SWISS模型预测该ORF编码Lysin蛋白的空间结构。对已确定的lysEha1 ORF序列设计表达引物。以简并引物经PCR扩增的产物为模板,采用表达引物经PCR扩增lysEha1基因完整的ORF,构建原核表达载体pET-30a(+)-lyEha1-ORF,经PCR和测序鉴定正确后通过原核表达系统表达并经Ni亲和层析柱法纯化LysEha1 ORF(即重组裂解酶蛋白rLysin),利用SDS-PAGE与western blot鉴定该蛋白的表达与纯化效果。简并引物的PCR结果显示,扩增到约1200 bp的目的条带,测序结果经ORF Finder分析显示:该片段的nt39~nt536存在一个498 bp的ORF;BLAST分析显示,该ORF属于大肠杆菌噬菌体Lysin家族基因。Lysin蛋白的二级结构含7段α螺旋,3段β折叠。表达引物的PCR结果显示在约500 bp处出现目的片段,测序结果显示该ORF为噬菌体lysin基因。SDS-PAGE和western blot结果均显示,在约25 ku处出现特异性目的条带,且rLysin主要在上清中表达,纯化后可见单一目的条带。采用浊度递减试验测定rLysin及其与EDTA联用(rLysin+EDTA)后分别对16株E.coli的杀菌活性。结果显示,rLysin对16株致病性大肠杆菌的总杀菌率为56.25%(9/16),rLysin+EDTA对上述细菌的总杀菌率达87.5%(14/16),rLysin+EDTA的杀菌率显著高于rLysin(P<0.05)。上述结果表明,噬菌体Hab-EA株可编码Lysin,本研究正确表达并纯化了该rLysin,并证实其对致病性大肠杆菌的杀菌活性较强,与EDTA联用可以提高rLysin对致病性大肠杆菌的杀菌活性。本研究为致病性大肠杆菌病的防控提供新的思路与途径。

关 键 词：大肠杆菌 噬菌体 裂解酶 杀菌活性

分 类 号：S852.61]