文献类型：期刊文章

作　　者：王晓晓[1] 付文玉[2] 庄文欣[3] 王倩[1] 刘宗昱[1] 刘金城[1]

机构地区：[1]潍坊医学院人体解剖与组织胚胎学省级重点实验室,山东潍坊261053 [2]潍坊医学院组织学与胚胎学教研室,山东潍坊261053 [3]潍坊医学院医学研究实验中心,山东潍坊261053

出　　处：《生物技术世界》

基　　金：山东省自然科学基金资助项目(Y2008C129);潍坊医学院科技创新研究基金重点项目(K1301002)

年　　份：2014

卷　　号：11

期　　号：10

起止页码：84-85

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的:构建含Nr4a2基因的绿色荧光慢病毒载体,并检测其体外表达目的基因的水平。方法:设计Nr4a2基因的引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增,插入经AgeⅠ/AgeⅠ酶切的GV287慢病毒载体构建GV287-Nr4a2慢病毒质粒。PCR鉴定、测序验证后,将其与pHelper1.0载体、pHelper2.0载体共同转染293T细胞(人胚肾细胞),48小时后收集含慢病毒颗粒的细胞上清液,经浓缩并测定滴度后感染293T细胞,72h后观察增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达。结果:酶切及测序鉴定证实成功构建了重组慢病毒载体GV287-Nr4a2;荧光显微镜下可见绿色荧光高度表达;Nr4a2蛋白能在293T细胞中有效表达;包装过表达慢病毒并测其浓缩滴度为2.0×108TU/ML。结论:成功构建Nr4a2慢病毒载体且在293T细胞中良好表达,为进一步转染大鼠骨髓间充质干细胞,基因治疗帕金森病奠定基础。

关 键 词：Nr4a2  慢病毒 载体构建  过表达

分 类 号：Q782]