文献类型：期刊文章

作　　者：龙彩虹[1] 吴少庭[2] 翁亚彪[1] 高世同[2] 张仁利[2] 林敏[2] 周爱琴[3]

机构地区：[1]华南农业大学动物医学院预防系 [2]深圳市卫生防疫站分子生物室,深圳518020 [3]华中科技大学同济医学院

出　　处：《中国人兽共患病杂志》

年　　份：2003

卷　　号：19

期　　号：2

起止页码：42-45

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2000、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、JST、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的　扩增弓形虫主要表面抗原 (SAG2 )编码基因片段并进行重组表达。方法　设计合成 1对引物 ,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列 ,以低熔点琼脂糖回收纯化 ,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后 ,再插入表达载体 pGEX - 4T - 2 ,经PCR和双酶切筛选 ,测序验证后 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并用SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果　从弓形虫核酸提取物中扩增出约 477bp的SAG2基因 ,构建成功了重组质粒 pGEX - 4T - 2 -SAG2 ;SAG2基因在大肠杆菌中得到高效表达。SDS -PAGE电泳 pGEX - 4T - 2 -SAG2的融合蛋白条带的分子量约为 42kD ,Westen -blot显示融合蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论　GST融合表达载体的构建和SAG2基因片段成功表达 ,为进一步为SAG2重组疫苗及重组诊断抗原的研制奠定了基础。

关 键 词：弓形虫表面抗原 SAG2基因片段  克隆 原核表达 免疫印迹

分 类 号：R382.5]