文献类型：会议

作　　者：李军伟 王斌 王惠

作者单位：大连海洋大学,辽宁省高校海洋生物资源可持续利用重点实验室

会议文献：2013年中国水产学会学术年会论文摘要集

会议名称：2013年中国水产学会学术年会

会议日期：20131022

会议地点：中国安徽合肥

主办单位：中国水产学会

出版日期：20131022

学会名称：中国水产学会

语　　种：中文

摘　　要：为建立一种检测迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)毒株方法以及研制其亚单位疫苗,本研究根据该菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白eseB基因序列设计引物,并在引物两端添加酶切位点BamHI和HindⅢ,以迟钝爱德华氏菌L-49231菌株总DNA为模板,扩增获得eseB基因;通过重组表达,电泳检测,Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组eseB蛋白;采用纯化的重组蛋白制备免疫血清,对诱导表达的重组蛋白进行Western blot分析。实验结果显示:PCR扩增得到了594bp的eseB基因开放阅读框;重组表达菌在IPTG诱导浓度为0.2mg/mL,诱导时间为1h时能很好的表达目标蛋白,其分子量约为25KDa;重组表达的eseB蛋白免疫新西兰兔获得效价为1:512000的高免血清;经Western blot分析,诱导表达的目的蛋白与免疫血清产生特异性反应条带;重组eseB蛋白免疫健康大菱鲆后,其血清中抗体效价可达到1:1024;注射重组eseB蛋白对大菱鲆免疫保护率为75%,通过ELISA检测感染后发病大菱鲆腹水中分离菌eseB蛋白均为阳性。

关 键 词：迟钝爱德华氏菌 Ⅲ型分泌系统  eseB基因  原核表达 抗体

分 类 号：S941[水产类]